Giardia duodenum یو پرازیتی ارګانیزم دی چې د giardiasis لامل کیږي، یو د کولمو انفیکشن په ځانګړي توګه په کوچني ماشومانو کې د اسهال کلینیکي نښو سره عام دی.موږ مخکې راپور ورکړی و چې extracellular G. duodenalis د intracellular oligomerization-like receptor 3 (NLRP3) پابند نیوکلیوټایډونو فعالول هڅوي او د Extracellular vesicle (EV) سراو له لارې د کوربه التهابي غبرګون تنظیموي.په هرصورت، په دې پروسه کې د روډینکوکل EV (GEV) د رنځجن سره تړلي مالیکولي نمونې او په giardiasis کې د NLRP3 انفلاسیون رول باید روښانه شي.
Recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 او alpha-7.3 giardins په GEV کې جوړ شوي، د موږک لومړني peritoneal macrophages ته لیږدول شوي، او د سوزش هدف مالیکول کیسپیس -1 اندازه کولو سره کشف شوي.د p20 بیان کچه سکرین شوې وه..G. duodenalis alpha-2 او alpha-7.3 giardines په اصل کې د NLRP3 انفلاسیوم (NLRP3, pro-interleukin-1 beta [IL-1β]، pro-caspase-1 او caspase-1 p20)، IL سرایت په اندازه کولو سره پیژندل شوي.د 1β کچه، د apoptotic spotted protein (ASC) oligomerization کچه، او د NLRP3 او ASC immunofluorescent ځایی کول.د G. duodenalis په رنځجنیت کې د NLRP3 انفلاسیون رول بیا د موږکانو په کارولو سره ارزول شوی و چې د NLRP3 فعالیت بند شوی و (NLRP3 بلاک شوی موږک) او د بدن وزن کې رنځپوهنې بدلونونه ، د ډوډینال پرازیتي بار او د ډوډینال نسجونو څارنه وشوه.برسېره پردې، موږ څیړنه وکړه چې آیا hiardines alpha-2 او alpha-7.3 د NLRP3 انفلاسیون له لارې په vivo کې IL-1β سرایت هڅوي او په موږکانو کې د G. duodenalis په ناروغۍ کې د دې مالیکولونو رول مشخص کړي.
Alpha-2 او alpha-7.3 giardines په ویټرو کې د NLRP3 انفلاسیون فعالولو هڅوي.دا د p20 caspase-1 د فعالیدو لامل شوی، د NLRP3، pro-IL-1β، او pro-caspase-1 پروټینونو د بیان کچه کې زیاتوالی، د IL-1β په سراو کې د پام وړ زیاتوالی، د ASA سپاټونو رامینځته کول. سایتوپلازم، او د ASA oligomerization شاملول.د NLRP3 التهاب د قلمي ضایع په موږکانو کې د G. duodenalis رنځپوهنه لا پسې زیاتوي.موږکان چې د NLRP3-بند شوي موږکانو څخه د ګیجج په واسطه درملنه شوي د ټرافوزایټس ډیر شمیر او د ډوډینال ویلي ته سخت زیان ښودلی، چې د نیکروټیک کریپټس لخوا مشخص شوي چې د لنډ شوي او شاخ کولو سره.په vivo تجربو ښودلې چې giardines alpha-2 او alpha-7.3 کولی شي د NLRP3 انفلاسیون له لارې د IL-1β سرایت رامینځته کړي، او د giardines alpha-2 او alpha-7.3 سره معافیت په موږکانو کې د G. duodenalis ناروغي کموي.
په ګډه سره د دې څیړنې پایلې وړاندیز کوي چې giardia alpha-2 او alpha-7.3 د کوربه NLRP3 سوزش د لوړولو لامل کیږي او په موږکانو کې د G. duodenalis انتان کموي، کوم چې د giardiasis مخنیوي لپاره ژمنې موخې دي.
Giardia duodenum یو بهرنۍ پروتوزوان پرازیت دی چې په کوچني کولمو کې ژوند کوي او په کال کې د اسهال سره د giardiasis 280 ملیون پیښې رامینځته کوي ، په ځانګړي توګه په پرمختللو هیوادونو کې د کوچني ماشومانو په مینځ کې [1].خلک د M. duodenum cysts سره د ککړو اوبو یا خواړو په څښلو اخته کیږي چې بیا معدې ته ننوځي او د معدې په جوس کې بهر کیږي.Giardia duodenum trophozoites د duodenal epithelium سره نښلوي، د زړه بدوالی، کانګې، اسهال، د معدې درد، او د وزن د ضایع کیدو سبب ګرځي.هغه کسان چې د معافیت او سیسټیک فایبروسیس سره مخ دي د انفیکشن لپاره حساس دي.انفیکشن د شفاهي او مقعد جنسیت له لارې هم پیښ کیدی شي [2].درمل لکه میټرونیډازول، ټینډازول، او نایټازوکساید د ډوډینال انتاناتو لپاره د درملنې غوره انتخابونه دي [3].په هرصورت، دا کیموتراپي درمل د منفي اړخیزو اغیزو لامل کیږي لکه مغز، سرطان، او جینټوکسیکیت [4].له همدې امله، د G. duodenalis انفیکشن د مخنیوي لپاره ډیرې اغیزمنې ستراتیژیو ته اړتیا ده.
انفلاسومونه د سایټوسولیک پروټین کمپلیکسونو ټولګي دي چې د طبیعي معافیت غبرګون برخه ده، د رنځجن یرغل په وړاندې دفاع کې مرسته کوي او د التهاب غبرګون منځګړیتوب کوي [5].د دې انفلاسیونونو په مینځ کې ، د نیوکلیوټایډ بانډنګ اولیګومیریزیشن (NOD) ریسیپټر 3 (NLRP3) نیوکلیوټایډ پابند اولیګومیریزیشن (NLRP3) نیوکلیوټایډ بائنڈنگ-لکه انفلاسیون په پراخه کچه مطالعه شوی ځکه چې دا د مختلف رنځوجن / پیتوسکولر نمونې لخوا کشف کیدی شي. DAMP)) پیژني، د طبیعي معافیت سیسټم فعالوي.او په ډیری التهابي ناروغیو کې د کولمو هوموستاسیس تنظیموي [6,7,8].دا د نمونې پیژندنې ریسیپټر (PRR) NLRP3، یو اډاپټر اپوپټوټیک سپټ شوی پروټین (ASC)، او یو اغیزمن پروکاسپیس -1 یا پروکاسپیس -11 لري.د NLRP3 انفلاسیون د رنځجن یرغل په وړاندې د کوربه په توګه عمل کوي، لکه څنګه چې په نیواسپورا کانینوم [9]، پاراکوسیډیډز بریسیلینسیس [10]، او د لیشمانیا مطالعاتو کې لیدل شوي.[11]، مګر دا هم راپور شوي چې د NLRP3 انفلاسیون فعالول د محافظتي معافیت غبرګون محدودوي او د ناروغۍ پرمختګ ته وده ورکوي، د بیلګې په توګه، په چینجونو کې [12].زموږ د پخوانیو موندنو پراساس، موږ راپور ورکړ چې د خارجي حجرو G. duodenalis د NLRP3 انفلاسیون د انټرا سیلولر فعالیت پیلوي او د خارجي سیلولر ویسیکلونو (EVs) پټولو سره د کوربه التهابي غبرګونونه تنظیموي [13].په هرصورت، په Vivo کې د G. duodenalis انفیکشن کې د NLRP3 انفلاسیون رول باید مشخص شي.
Giardins په اصل کې د G. duodenalis cytoskeleton ساختماني اجزاو په توګه تشریح شوي او په کوچني کولمو کې د ټرافوزوایټ حرکت او د اپیتیلیل حجرو ضمیمه کې مهم رول لوبوي.د چاپیریال سره د ښه تطابق او د دوی رنځجنیت زیاتولو لپاره، G. duodenalis trophozoites یو ځانګړی سایتوسکیلیټل جوړښت رامینځته کړی چې 8 flagella، 1 منځنۍ بدن، او 1 ventral disc [14].د Giardia duodenum trophozoites خپل سایتوسکلیټون کاروي تر څو پورتنۍ کوچنۍ کولمو ته ننوځي، په ځانګړې توګه ډوډینم، او د انټروسایټونو سره نښلوي.دوی په دوامداره توګه مهاجرت کوي او د اپیتیلیل حجرو سره د حجرو میټابولیزم په کارولو سره نښلوي.له همدې امله، د دوی د سایټوسکلیټون او ویروس تر مینځ نږدې اړیکه شتون لري.د Giardia duodenum لپاره ځانګړي Giardines د سایټوسکلیټون جوړښت اجزا دي [15] او په څلورو ټولګیو ویشل شوي: α-, β-, γ-، او δ-giardines.د α-giardin کورنۍ 21 غړي لري، چې ټول یې د کلسیم پورې تړلي وړتیا لري چې فاسفولیپیډونه [16] وتړي.دوی سایتوسکلیټون هم د حجرو غشا سره نښلوي.په هغو کسانو کې چې اسهال د G. duodenalis له امله رامینځته کیږي، α-giardins د انفیکشن په وخت کې خورا څرګند او معافیتي دي [17].د Giardia alfa-1 پر بنسټ هیټرولوژس واکسینونه په موږکانو کې د giardiasis په وړاندې خوندي دي او د واکسین پراختیا لپاره احتمالي کاندید انټيجن دي [18].Alpha-8 giardin، د پلازما په غشا او فلاجیلا کې ځای پر ځای شوی، مګر په وینټرل ډیسک کې نه، په G. duodenalis کې د ټرافوزایټس حرکت او وده کچه لوړوي [19].Alpha-14 giardin په فلاجیلا کې د مایکروټیوبیل جوړښتونو سره نښلوي او د G. duodenalis په وړتیا اغیزه کوي [20].Alpha-11 giardine د ژوند په دوره کې په پراخه کچه شتون لري، او د الفا-11 ګیرډین زیاتوالی پخپله G. duodenalis ته زیان رسوي [21].په هرصورت، دا روښانه نده چې آیا الفا-2 ګیرډین او الفا - 7.3 ګیرډین د G. duodenalis انفیکشن او د دوی د اصلي میکانیزمونو په وړاندې محافظتي دي.
په دې څیړنه کې، د recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine او pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine د موږک لومړني peritoneal macrophages ته لیږدول شوي ترڅو کوربه NLRP3 فعال کړي.بیا د انفلاسیون هدفونه وڅیړل شول.موږ د G. duodenalis په رنځپوهنه کې د NLRP3 انفلاسیون رول هم ارزولی، څیړنه یې وکړه چې آیا الفا-2 او الفا-7,3 ګیرډینز په ویوو کې د NLRP3 انفلاسیون فعالولو هڅوي، او معلومه شوه چې د ګیارډینز دا دوه رولونه د ناروغۍ په ناروغۍ کې. G. duodenalis.زموږ ګډ هدف د G. duodenalis انفیکشن مخنیوي لپاره د ژمنو اهدافو رامینځته کول وو.
وحشي ډول (WT) C57BL/6 ښځینه موږکان چې عمرونه یې د 5-8 اونۍ دي د لیونینګ چنګشینګ تجربوي حیواناتو مرکز (لیاو نینګ، چین) څخه اخیستل شوي.موږکانو اوبو ته وړیا لاسرسی درلود، تعقیم شوي خواړه یې ترلاسه کړل او د 12/12 ساعتونو رڼا / تیاره دوره کې ساتل کیدل.د انتاناتو دمخه، موږکانو د څښاک په اوبو کې د انټي بیوټیک اډ لیبیتم ترلاسه کړ چې د امپیسیلین (1 mg/mL)، وینکوماسین (1 mg/mL)، او neomycin (1.4 mg/mL) (ټول د شانګهای، چین، مصنوعي ارګانیزم څخه اخیستل شوي) [22] ].].موږکان چې د 24 ساعتونو لپاره یې د خوړلو او څښلو توان له لاسه ورکړی او ≥ 20٪ د بدن وزن یې له لاسه ورکړی په انساني توګه د رحم د بې ځایه کیدو له امله د خوښۍ وړ و.
WB G. duodenalis trophozoites (American Type Culture Collection, Manassas, USA) د 12.5% ​​fetal bovine serum (FBS; Every Green, Zhejiang, China) او 0.1% bovine bile (Sigma-Aldrich, St. Missouri, USA) سره ضمیمه شوي ).USA) د مایکرو ایروبیک شرایطو لاندې.متقابل ټرافوزایټس په یخ کې راټول شوي او د 1:4 په تناسب د نورو تکثیر لپاره تیریږي.
د Giardia duodenum cysts هڅول شوي لکه څنګه چې مخکې تشریح شوي [23]، ټرافوزایټس په لوګاریتمیک مرحله کې راټول شوي او بیا د انکاپسولیشن انډول کولو متوسطه، pH 7.1 (تعدیل شوي TYI-S-33) سره د 1 × 106 trophozoites/mL تر وروستي غلظت سره مینځل شوي.د صفرا غلظت 0.05% متوسط).ټرافوزایټس د لوګاریتمیک ودې مرحلې پورې په 37 درجې سانتي ګراد کې د انیروبیک شرایطو لاندې کرل شوي.متوسطه د cyst inducing منځني ته بدله کړئ (pH 7.8؛ تعدیل شوي TYI-S-33 متوسطه د 1٪ bile غلظت سره) او کلتور G. duodenalis په 37°C کې د 48-96 ساعتونو لپاره، په دې وخت کې د سیسټونو جوړښت د مایکروسکوپ لاندې لیدل شوی.وروسته له دې چې ډیری ټرافوزایټونه د سیسټونو جوړولو لپاره هڅول شوي، د کلتور مخلوط راټول شوي او په جراثیمي ډیونیز شوي اوبو کې بیا ځای پرځای شوي ترڅو پاتې ټرافوزایټس لیز کړي.سیسټونه په موږکانو کې د ګیسټریک ټیوب له لارې د راتلونکو تحلیلونو لپاره په 4 ° C کې شمیرل شوي او زیرمه شوي.
د Giardia extracellular vesicles (GEVs) بډایه شوي لکه څنګه چې مخکې تشریح شوي [13].د لوګاریتمیک ودې په مرحله کې ټرافوزوایټونه په تعدیل شوي TYI-S-33 متوسطه کې بیا ودرول شول چې د Exosome-depleted FBS (بیولوژیکي صنعت، Beit-Haemek، Israel) سره د 1 × 106 پرازیتونو/mL وروستي غلظت ته چمتو شوي او د 12 ساعتونو لپاره سینه بغل شوي.د 10 دقیقو لپاره 2000 ګرامه، د 45 دقیقو لپاره 10000 ګرامه او د 60 دقیقو لپاره 100,000 ګرامه د سینټرفیوګیشن په واسطه د کلتور سپرناټینټ څخه جلا شوي.ورقې په فاسفیت بفر شوي مالګین (PBS) کې منحل شوي، د BCA پروټین اسیس کټ (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) په کارولو سره اندازه شوي او په -80 ° C. کې زیرمه شوي یا مستقیم د نورو تحلیلونو لپاره کارول شوي.
لومړني موږک peritoneal macrophages چمتو شوي لکه څنګه چې مخکې تشریح شوي [24].په لنډه توګه، موږکان (د 6-8 اونیو عمرونه) د 2.5 ملی لیتر 2.98٪ Difco مایع تیوګلیکول میډیم (BD, Franklin Lakes, NJ, USA) سره انجیکشن شوي (intraperitoneally [ip]) او 3-4 تالو ته خواړه ورکړل شوي.د میکروفیجونو تعلیق د موږکانو د معدې له غار څخه د euthanasia وروسته راټول شوي او د 10 دقیقو لپاره په 1000 g کې 3 ځله سینټرفیوګ شوي.راټول شوي حجرې د CD11b مارکر په کارولو سره د فلو سایتومیټري په واسطه کشف شوي تر هغه چې د حجرو پاکوالی %98>، بیا په 6-څاه د سیل کلتور پلیټونو (4.5 x 106 حجرې/څاه) کې اضافه شوي او د 10٪ FBS (Bioindustry) سره په 37 درجې C.او 5% CO2.
RNA د 1 × 107 trophozoites څخه د TRIzol reagent (Vazyme, Nanjing, China) په 1 ملی لیتر کې استخراج شوی، جینومیک DNA د ټول G. duodenalis RNA څخه د MonScript dsDNase (موناد، ووهان، چین) په کارولو سره ایستل شوی او بشپړونکی DNA (د سی سی ډی) سره ترکیب شوی. د جوړونکي لارښوونو سره سم د MonScript RTIIII سوپر مکس (موناد) کارول.
د هدف G. duodenalis جین لپاره د CDS ترتیب معلومات د NCBI GenBank څخه ترلاسه شوي.پریمر 5.0 وکاروئ د هر هدف جین لپاره ځانګړي بې سیمه کلونینګ پریمر ډیزاین کولو لپاره.فارورډ پرائمر (5′-3′) له دریو برخو څخه جوړ دی: د لینر شوي ویکتور pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) سره یو متقابل ترتیب او د کوډون ATG او GNN پیل کړئ (که لومړی اساس G نه وي).دا د بیان موثریت ښه کولو لپاره ترسره کیږي.برسېره پردې، لږترلږه 16 bp ګډ اډې (د GC منځپانګې 40-60%/Tm نږدې 55 °C).ریورس پریمر (5′-3′) دوه برخې لري، د EcoRV-linearized ویکتور pcDNA3.1(+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) سره یو متقابل ترتیب او لږترلږه 16 bp ګډ بیس.(د وروستیو دوو تمځایونو پرته).اډې) یو کوډون لکه AA یا GA ترڅو بیا جوړونکي پلاسمیډ ته اجازه ورکړي چې خپل لیبل شوي پروټینونه څرګند کړي).د پرائمر ترتیبونه په جدول 1 کې لیست شوي او د کانګمیټ بایو ټیکنالوژۍ شرکت ، لمیټډ (چنګچون ، چین) لخوا ترکیب شوي.
هدفونه د Pfu DNA پولیمیریز (Tiangen, Beijing, China) یا Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Beijing, China) په کارولو سره د چمتو شوي G. duodenalis cDNA په توګه د ټیمپلیټ په توګه پراخه شوي.د eukaryotic expression vector plasmid pcDNA3.1(+) د محدودیت انزایم EcoRV سره خطي شوی او د فاسټ AP (Thermo Fisher Scientific) په کارولو سره ډیفاسفوریلیډ شوی.خطي شوي pcDNA3.1(+) ټوټې او پراخ شوي هدف جین ټوټې د DNA جیل پاکولو کټ (Tiangen) په کارولو سره پاکې شوې او د Nanodrop ND-2000 (Thermo Fisher Scientific) په کارولو سره اندازه شوې.د pcDNA3.1(+) ټوټه او د هر هدف جین ټوټه د MonClone واحد مجلس کلونینګ مکس (Monad Biotech Co., Ltd., Suzhou, China) په کارولو سره بیا یوځای شوي او د Comate بایو ساینس شرکت محدودیت (چنګچون، چین) په کارولو سره د DNA ترتیب لخوا تایید شوی..
د Endotoxin-free plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 او pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 د SanPrep Endotoxin-free Plasmid Mini Kit (Sangon Biotech) په کارولو سره تولید شوي.غلظت د 500 ng/µl څخه پورته ساتل شوی و ترڅو ډاډ ترلاسه شي چې د ایولوشن بفر کې EDTA د لیږدونې ارزونې کې مداخله نه کوي.لومړني موږک peritoneal macrophages د 12 ساعتونو لپاره د بشپړ RPMI 1640 منځني (بیولوژیکي صنعت) سره په 6 څاه پلیټونو کې کرل شوي، بیا حجرې 3 ځله په ګرم PBS کې مینځل شوي ترڅو پنیسیلین او سټریپټومیسین لیرې کړي، او بیا په منځني ډول د بشپړ متوسط ​​​​سره ضمیمه شوي.د Endotoxin-free plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 او pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 μg) په 125 μl کې د Opti-MEM کم شوي سیرم میډیم (Gibco, Thermo Fisher Scientific) کې ککړ شوي..بیا 5 µl Lipofectamine 2000 transfection reagent (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) په 125 µl ټیټ سیرم Opti-MEM متوسطه کې ضعیف شو.Liposome-DNA کمپلیکسونه د Lipofectamine 2000 سره د انډوټوکسین څخه پاک پلاسمیډ مخلوط کولو سره چمتو کړئ او مخلوط ته اجازه ورکړئ چې د خونې په حرارت کې د 5 دقیقو لپاره ودریږي.کمپلیکسونه په جلا توګه په هر څاه کې حجرو ته انتقال کړئ او ورو ورو مخلوط کړئ.د 4 ساعتونو وروسته، د سیل کلتور منځنی د 2 ملی لیتر بشپړ RPMI 1640 منځنی سره بدل شو او کلتور د 24 ساعتونو لپاره دوام درلود.د تازه حجرو کلتور منځنی حجرو ته اضافه شوی او د مختلف وخت نقطو لپاره د ارزونې ډیزاین پورې اړه لري.
د پروټین نمونې د سپرناټینټ او سیل لیزیټ څخه چمتو شوي لکه څنګه چې مخکې تشریح شوي [25].د پرو-IL-1β، pro-caspase-1، caspase-1 p20، NLRP3، β-actin، او His-tag لپاره د جھلی لیږد پیرامیټونه 200 mA/90 min وو.د انټرلیوکین 1β (IL-1β؛ R&D سیسټمونه، مینیپولیس، مینیسوټا، امریکا)، کیسپیس-1 (p20) (اډیپوګین، سویزرلینډ) او NLRP3 (اډیپوګین SA، ایپیلینګیس، سویزرلینډ) او 1:5000 د هغه ټګ په نښه کولو لپاره ووهان، چین) او β-ایکټین (پروټینټیک، ووهان، چین).
د disuccinimide suberate (DSS) سره کراس لینک کول ترسره شوي لکه څنګه چې مخکې تشریح شوي [26].حجرې 3 ځله د سړې PBS سره مینځل شوي او په بشپړ ډول د 27 ګیج ستنې سره په 50 μl ASC عکس العمل بفر (pH 8.0) کې 25 mM Na2PO4، 187.5 mM NaCl، 25 mM HEPES او 125 mM NaHCO3 لري.مخلوط د 3 دقیقو لپاره په 5000 g کې سینټرفیوژ شوی و او ګولۍ د 10 μl DSS (25 mM په DMSO کې) او 40 μl ASC عکس العمل بفر سره د 30 دقیقو لپاره په 37 درجې سانتي ګراد کې سینټرفیوج شوی.د 10 دقیقو لپاره په 5000 g کې سینټرفیوګریشن وروسته ، ګولۍ د 40 µl ASC عکس العمل بفر او 10 µl د 6x پروټین بار کولو بفر (TransGen, بیجینګ ، چین) په محلول کې حل شوې او بیا محلول د 15 لپاره د خونې په تودوخې کې وچول شو. دقیق، بیا 10 دقیقې جوش کړئ.د پروټین نمونې بیا د 1:500 د کمولو تناسب کې د لومړني ASC ضد انټي باډیز (وانلیبیو، شینیانګ، چین) په کارولو سره د لویدیځ داغونو سره مخ شوي.
د مخکینۍ بیان شوي کړنالرې [13] په تعقیب، د حجرو کلتور سپرناټینټ راټول شوي او د پرو - انفلاسیون سایټوکین IL-1β سرایت د موږک IL-1 بیټا ELISA کټ (Invitrogen، Thermo Fisher Scientific) په کارولو سره ټاکل شوی.د OD450nm ارزښتونه د IL-1β معیاري وکر په کارولو سره د پروټین غلظت ته واړوئ.
په پوښلیپونو پوښل شوي حجرې په ګرم PBS کې 3 ځله په نرمۍ سره مینځل شوي، د نسج حجرو فکسټیو (بایوشارپ، بیجینګ، چین) کې د 10 دقیقو لپاره د خونې د حرارت درجه (RT) کې ټاکل شوي، په 0.1٪ Triton X-Permeabilize کې په 100 (PBS کې منحل شوي؛ بایوشارپ ) د خونې په حرارت کې د 20 دقیقو لپاره او د خونې په حرارت کې د 2 ساعتونو لپاره په 5٪ بوواین سیرم البومین (PBS کې) بلاک کړئ.بیا حجرې په ترتیب سره د ASC (1:100 dilution) یا NLRP3 (1:100 dilution) په وړاندې د لومړني انټي باډیز سره په 4°C کې د شپې په اوږدو کې سینګار شوي ، او Cy3 لیبل شوي وزې د خرگوش ضد IgG(H+L) (1:400؛ EarthOx) , San Francisco, CA, USA) یا FITC-conjugated وزې د موږک ضد IgG (1:400؛ Earthox) د شپې په تیاره کې د 1 ساعت لپاره په 37 درجې سانتي ګراد کې.نیوکلی د 5 دقیقو لپاره د Hoechst 33258 (10 μg/ml؛ UE, Suzhou, China) سره داغ شوي او د فلوروسینس مایکروسکوپ لاندې مشاهده شوي (Olympus Corporation, Tokyo, Japan).
موږکان په څلورو ګروپونو ویشل شوي وو (n = 7 په هر ګروپ کې): (i) د PBS درملنه شوي منفي کنټرول ګروپ (یوازې PBS؛ gavage 100 µl/mous PBS وروسته د ورځني انټراپیریټونیل انجیکشن 100 µl/ماوس PBS 3 ساعته وروسته).په دوامداره توګه د 7 ورځو لپاره؛(ii) د منفي کنټرول ګروپ د MCC950 inhibitor [27] سره درملنه شوې (100 μl/mouse د PBS gavage له لارې، 3 ساعته وروسته، 10 mg/kg د بدن وزن [BW] MCC950 [په PBS کې] هره ورځ په انټراپیریټون ډول اداره کیږي، موده 7 ورځې)؛(iii) د G. duodenalis cyst انفیکشن ګروپ (1.5 x 106 cysts/mouse by gavage، 3 ساعته وروسته، 100 μl/mouse PBS intraperitoneally هره ورځ د 7 ورځو لپاره اداره کیږي)؛(iv) د G. duodenalis cyst ګډ انفیکشن ګروپ MCC950 inhibitor درملنې ګروپ (1.5×106 cysts/mouse via gavage، 10mg/kg د بدن وزن MCC950 intraperitoneally هره ورځ د 7 ورځو لپاره په 3h).د هر موږک د بدن وزن هره ورځ وڅارل شو او ټول موږکان په اوومه ورځ له منځه یوړل شول.حاصل شوی duodenum (3 سانتي متره اوږد) په 1 ملی لیتر PBS کې په کوچنیو ټوټو ویشل شوي، سیسټونه په شپه کې په PBS کې په 4 درجو کې ویجاړ شوي، او G. duodenalis trophozoites.تازه duodenum (1 سانتي اوږده) د هیماتوکسیلین او eosin (H&E) داغ لپاره جلا شوی و.
موږکان په دوو ډلو ویشل شوي وو: (i) د MOCK کنټرول ګروپ او (ii) د MCC950 مخنیوی ګروپ.په هر ګروپ کې پنځه درملنې شتون درلود (n = 7 / د درملنې ګروپ): (i) د PBS درملنې منفي کنټرول ګروپ (یوازې PBS؛ 100 μl / ماوس PBS، د انټرماسکولر (IM) انجیکشن (ټیبیالیس انټریر) [28, 29] ؛( ii) pcDNA3.1(+) د پلاسميډ منفي کنټرول ګروپ (100 µg/mouse DNA، د انټرمسکولر انجیکشن له لارې)؛ (iii) G. duodenalis cyst انفیکشن مثبت کنټرول ګروپ (1.5 x 106 cysts/mouse, د gavage له لارې) (iv) a ګروپ د پلازمیډ pcDNA3.1(+) -alpha-2 (100 μg/mouse DNA، د انټرماسکلر انجیکشن په واسطه)، او (v) هغه ډله چې د پلازمیډ pcDNA3.1(+) -alpha-7.3 (100 µg/mouse) سره درملنه شوې DNA، د 12 ساعتو تیریدو وروسته، د MCC950 مخنیوی ګروپ موږکانو د 7 ورځو لپاره د MCC950 (10 mg/kg د بدن وزن) هره ورځ د انټراپیریتونیل انجیکشن ترلاسه کړ، پداسې حال کې چې د MOCK ګروپ موږکانو د PBS درملنې مساوي مقدار ترلاسه کړ. د وینې نمونې ترلاسه شوې. د سترګو د موږکانو څخه راټول شوي او د شپې په 4 °C کې پریښودل شوي د سیرم نمونې د IL-1β کچې او اندازه کولو لپاره د انزایم پورې تړلي اموناسوربینټ پراساس (ELISA) په کارولو سره جلا شوي.
پنځه دېرش موږکان په پنځو ګروپونو ویشل شوي وو (n=7/group).ګروپ 1 د منفي کنټرول ډله وه چې د PBS سره درملنه شوې وه: موږکان 100 μl PBS intramuscularly او 3 ورځې وروسته د ګیجج لخوا ترلاسه کړل.ګروپ 2 د کنټرول مثبت ګروپ دی چې د G. duodenalis cysts په ناروغۍ اخته شوی: موږکان د 100 μl PBS سره انجیکشن شوي، او 3 ورځې وروسته 1.5 x 106 cysts/mouse intragastrically injected.دریمه ډله - د pcDNA3.1(+) سره د پلاسمید واکسین کول د ډوډینال سیسټ انفیکشن لپاره د کنټرول ګروپ سره په ګډه: موږکانو 100 μg پلازمیډ DNA pcDNA3.1(+)(im) په شفاهي ډول ترلاسه کړل، 1.5×106 cysts/mouse 3 د څو لپاره ورځې4 او 5 ګروپونه د PcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine plasmid یا pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine plasmid د G. duodenalis cyst انفیکشن سره په ترکیب کې بیا جوړونکي وو.تجربه ګروپ: موږکانو 100 µg pcDNA3 ترلاسه کړل.1(+)-giardine plasmid DNA (im)، بیا 3 ورځې وروسته، 1.5 × 106 cysts/mouse د ګاویج له لارې انجیکشن شوي.د هر موږک د بدن وزن د ټیوب له لارې د G. duodenalis cyst معرفي کولو وروسته وڅیړل شو.تازه ډوډینم د پرازیتي بار اندازه کولو او د HE داغونو تحلیل لپاره راټول شوي.
د هسټوپیتولوژیکي بدلونونه د مخکینۍ خپاره شوي پروسیجر سره سم تحلیل شوي [30].تازه ډوډینم د نسج حجرو فکسټیک سره تنظیم شوی ، په پارافین کې ځای پرځای شوی ، په 4 μm برخو کې پرې شوی ، د H&E سره رنګ شوی او د سپک مایکروسکوپ لاندې تحلیل شوی.د اوو خپلواکو موږکانو څخه په اوو نسجونو برخو کې نمایندګي رنځپوهنې بدلونونه د رنځپوهنې لخوا ارزول شوي چې د درملنې څخه ناخبره دي او په 200x میګنیفیکیشن کې نیول شوي.د ویلی اوږدوالی او د کریپټس ژوروالی د مخکې تشریح شوي میتودونو سره سم اندازه شوي.
پایلې په ویټرو او ان ویوو کې په درې اړخیزه توګه ترلاسه شوې.ګرافونه د GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA) په کارولو سره رامینځته شوي.د دوو ډلو ترمنځ توپیرونه د ټیسټ لخوا تحلیل شوي، پداسې حال کې چې د ≥3 ګروپونو ترمنځ توپیرونه د SPSS سافټویر (نسخه 22.0؛ SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA) په کارولو سره د توپیر د یو طرفه تحلیل (ANOVA) لخوا تحلیل شوي.ډاټا د لیوین ټیسټ په کارولو سره د توپیر د یووالي لپاره تحلیل شوي او د بونفیروني پوسټ هاک ازموینې (B) لخوا تعقیب شوي.اهمیت د P<0.05، P <0.01، او P <0.001 (د پام وړ نه دی) (P>0.05) په توګه څرګند شوی.
د جینونو او جینومونو د کیوټو انسایکلوپیډیا (KEGG) کې د GEV پروټومیکس زموږ پخوانی تحلیل وښوده چې ډیری هدفونه ممکن د سوزش سیګنال لارې په فعالولو کې دخیل وي [13].موږ دوه امید لرونکي هدفونه غوره کړل، الفا-2 او الفا-7.3 ګیرډینز، دا مالیکولونه پراخوي او د pcDNA3.1(+) یوکریوټیک څرګندونکي ویکتور جوړولو لپاره یې وکاروئ.د ترتیب کولو وروسته، recombinant pcDNA3.1(+)-alpha-2 او alpha-7.3 giardine expression plasmids په لومړني موږک peritoneal macrophages بدل شول، او د التهاب د caspase-1 p20 لاسلیک پروټین (د فعاله caspase-1 یوه ټوټه) وپیژندل شو. د کلیدي مالیکولونو روښانه کولو په توګه چې کولی شي سوزش رامینځته کړي.پایلو وښودله چې الفا-2 او الفا-7.3 جیارډینز کولی شي د GEV په څیر د p20 caspase-1 څرګندونه رامینځته کړي.د کاسپیس-1 فعالولو باندې هیڅ اغیزه د غیر درملنې منفي کنټرول (یوازې PBS) او پلاسمید کنټرول pcDNA3.1(+) (شکل 1) کې ونه موندل شوه.
د pcDNA3.1(+)-alpha-2 او alpha-7.3 giardins په واسطه د p20 caspase-1 فعالولو اندازه کول.recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 او alpha-7.3 giardines (د هرې لین څخه پورته) په لومړني موږک peritoneal macrophages کې بدل شوي او د کلتور سپرناټینټ 24 ساعته وروسته راټول شوي.لویدیځ بلاټینګ د لاسلیک کیسپیس -1 p20 انفلاسیوم پروټین د بیان کچې اندازه کولو لپاره کارول شوی و.د PBS-یوازې درملنې ګروپ (لین C) او pcDNA3.1 (+) مونوتراپي ګروپ (pcDNA3.1 لین) د منفي کنټرول په توګه کارول شوي، او د GEV درملنې ګروپ د مثبت کنټرول په توګه کارول شوی.د بیا یوځای کیدونکي پروټین څرګندونه په هر پروټین کې د هسټیډین ټاګ په موندلو سره تایید شوه، او د پروټین متوقع بډونه الفا-2 ګیرډین (38.2 kDa) او الفا - 7.3 giardine (37.2 kDa) وو.GEV، Giardia duodenum extracellular vesicles، pcDNA3.1(+)، EcoRV-linearized vector، SUP، supernatant
د دې لپاره چې دا معلومه کړي چې آیا الفا-2 ګیرډین او الفا-7.3 ګیرډین د p20 caspase-1 بیان هڅوي او د کوربه NLRP3 انفلاسیون غبرګون په فعالولو کې رول لوبوي، pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine او pcDNA3.1(+)-alpha -7.3 giardin د ریکومبینینټ پلازمیډ DNA سره په لومړني موږک peritoneal macrophages کې بدل شوی و، او د کلیدي التهابي پروټینونو NLRP3 د بیان، ځایی کولو، او oligomerization کچه ټاکل شوې وه.په دې تجربه کې، GEV د مثبت کنټرول ګروپ په توګه کارول شوی و، او د درملنې هیڅ ګروپ (یوازې PBS) یا د pcDNA3.1 (+) د لیږد درملنې ګروپ منفي ګروپ و.پایلو وښودله چې لکه څنګه چې د GEV ګروپ کې، د giardin pcDNA3.1(+)-alpha-2 او giardin pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 recombinant plasmid DNA د NLRP3، پرو IL-1β او د لوړولو په پایله کې. procaspase-1 او caspase-1 فعالول (انځور 2a).سربیره پردې، دواړه ګیرډینونه د پام وړ IL-1β سرایت (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.1000; alpha-2 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.007. ).;alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P <0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (شکل 2b).د ASC ډیری پروټینونه د غیر درملنې ګروپ کې یا د درملنې ګروپ کې د pcDNA3.1(+) پلاسمیډ سره لیږدول شوي مونومیریک وو، د pcDNA3.1(+) -alpha-2 یا pcDNA3.1(+)-الفا- په مقابل کې. 7.3 ګیرډیند ASC oligomerization د GEV مثبت کنټرول ګروپ یا ګروپ په بیا جوړونکي پلاسمیډ DNA کې رامینځته شوی، چې د oligomeric بڼه ښیي (شکل 2c).دا لومړني معلومات وړاندیز کوي چې الفا-2 ګیرډین او الفا-7,3 ګیرډین کولی شي د NLRP3 سوزش فعاله کړي.د ASC او NLRP3 د ځایی کولو په اړه د امینو فلوروسینټ وروستیو مطالعاتو وښودله چې د منفي کنټرول ګروپ کې، د ASC پروټین په ټول سایټوپلازم کې ویشل شوی و او د pcDNA3.1(+)-alpha-2 د giardine یا pcDNA3 سره د محرک کولو په وخت کې د ډاټ سیګنال په توګه څرګند شو.1(+)-alpha-7,3 giardine group یا GEV مثبت کنټرول ګروپ (شکل 2d).د منفي کنټرول او پلاسمایډ درملنه شوي pcDNA 3.1 ګروپونو کې، د NLRP3 پروټین سیګنال ندی موندل شوی، پداسې حال کې چې د pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine یا pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 په ځواب کې د فلوروسینټ سیګنال نقطه کشف شو..giardine په سایتوپلازم کې یا د HEV په محرک کې موندل کیږي (انځور 2e).دا معلومات نور هم ښیي چې G. duodenalis giardin alpha-2 او giardin alpha-7.3 د موږک په لومړني peritoneal macrophages کې د NLRP3 انفلاسیون فعالوي.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin او pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin په موږک peritoneal macrophages کې د NLRP3 انفلاسیون فعالوي.د recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin او pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin لومړني مورین peritoneal macrophages او حجرو ته انتقال کړئ، یا د بیان تحلیل لپاره د 24 ساعتونو په دننه کې سپرناټینټ راټول کړئ، oligomerization , سرایت.او د کلیدي التهابي پروټینونو ځایی کول.د PBS-یوازې (C) ګروپ او د pcDNA3.1 (+) واحد درملنې ګروپ د منفي کنټرول په توګه کارول شوی و، او د GEV درملنې ګروپ د مثبت ګروپ په توګه کارول شوی و.یو کلیدي التهابي پروټینونه NLRP3، په شمول د NLRP3، پرو-IL-1β، پرو-کیسپیس-1، او p20 کاسپیس-1، د لویدیځ داغونو لخوا کشف شوي.b په سپرناټینټ کې د IL-1β د سراو کچه د انزایم پورې تړلي اموناسوربینټ معاینې (ELISA) په کارولو سره ټاکل شوې.د کنټرول او تجربوي ګروپونو ترمنځ توپیرونه د SPSS سافټویر نسخه 22.0 په کارولو سره د تغیراتو (ANOVA) یو طرفه تحلیل لخوا تحلیل شوي.ستوري د ګروپونو **P <0.01 او ***P <0.001 ترمنځ د پام وړ توپیرونه په ګوته کوي.c په ګولیو کې د ASC oligomerization کچه د DSS کراس لینک کولو تحلیل لخوا ټاکل شوې ، پداسې حال کې چې د ASC کچه په حجرو lysates کې د بار کولو کنټرول په توګه کارول شوې.د امیونو فلوروسینس په کارولو سره د ISC ځایی کولو لید.د امیونو فلوروسینس د NLRP3 ځایی کولو لپاره کارول کیده.ASC، د اپوپټوټیک سپیک په څیر پروټین؛IL, interleukin;NLRP3، د نیوکلیوټایډ پابند oligomerization په څیر ریسیپټر 3؛ns، د پام وړ نه دی (P > 0.05)
دواړه G. duodenalis او GEVs چې دا پټوي NLRP3 انفلاسیون فعالوي او په ویټرو کې د کوربه التهابي غبرګون تنظیموي.په دې توګه، د G. duodenalis په رنځپوهنه کې د NLRP3 انفلاسیون رول ناڅرګند پاتې دی.د دې مسلې د څیړلو لپاره، موږ د G. duodenalis cyst په ناروغۍ اخته موږکانو او د G. duodenalis cyst + MCC950 inhibitor درملنې سره اخته موږکانو ترمنځ یوه تجربه ډیزاین کړه او د NLRP3 انفلاسیون څرګندونه پرتله کړه کله چې د G. duodenalis cyst سره اخته شوي.د تجربې تفصیلي سکیم په 3a شکل کې ښودل شوی.د درملنې په مختلفو ګروپونو کې د موږکانو د بدن وزن کې بدلونونه د سیسټونو سره د انفیکشن وروسته د 7 ورځو لپاره څارل شوي، او پایلې یې په 3b شکل کې ښودل شوي.د خالص PBS سره د درملنې ګروپ په پرتله، پایلو ښودلې چې (i) د G. duodenalis cyst په ناروغۍ اخته موږکانو د بدن وزن د انفیکشن وروسته له 3 څخه تر 7 ورځې پورې کم شوی؛(ii) د MCC950 inhibitor سره درملنه د موږکانو د بدن په وزن کې د پام وړ اغیزه نه درلوده..د واحد انفیکشن ګروپ په پرتله، د ډوډینال انفیکشن ګروپ BW د MCC950 سره درملنه شوي مختلف درجو ته راټیټه شوې (ورځ 1: ANOVA, F(3, 24) = 1.885, P = 0.0148؛ دویمه ورځ: ANOVA, F(3, 24) ). (3, 24) = 0.6497, P = 0.0645; 6 ورځ: ANOVA, F(3, 24) = 5.457, P = 0.0175; اووم: ANOVA, F(3, 24) = 2.893, P = 0.0202).دا ډاټا ښیي چې NLRP3 انفلاسیوم موږکان د ډوډینال انفیکشن په لومړیو مرحلو (2-4 ورځو) کې د وزن د پام وړ کمښت څخه ساتي.بیا مو موخه دا وه چې په duodenal lavage مایع کې G. duodenalis trophozoites کشف کړو او پایلې یې په 3c شکل کې ښودل شوي.د G. duodenalis cyst انفیکشن ګروپ په پرتله، په duodenum کې د ټرافوزایټس شمیر د پام وړ زیاتوالی وروسته له دې چې د NLRP3 انفلاسیون (t(12) = 2.902، P = 0.0133).د ډیوډینال نسجونه چې د HE سره داغ شوي د منفي کنټرول په پرتله چې یوازې د PBS او MCC950 سره درملنه شوي ښودل شوي: (i) G. duodenalis cyst انفیکشن د duodenal villi (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P= 0.0488 په پایله کې زیانمن شوی. ) او کریپټ ایټروفي (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089)؛(ii) د موږکانو څخه duodenum د G. duodenalis cysts سره اخته شوي او د MCC950 مخنیوی کونکو سره درملنه کیږي.duodenal villi خراب شوي او مړه شوي (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) د atrophy او crypt branching (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (انځور 3d- f) .دا پایلې وړاندیز کوي چې د NLRP3 انفلاسیون د G. duodenalis د ناروغۍ په کمولو کې رول لوبوي.
د Giardia duodenum انفیکشن کې د NLRP3 انفلاسوم رول.موږکان د duodenococcal cysts سره ګیج شوي (iv) او بیا د MCC950 (ip) سره یا پرته درملنه شوي.د PBS یا MCC950 سره د درملنې واحد ګروپونه د کنټرول په توګه کارول شوي.تجربه ګروپ او د درملنې رژیم.b د درملنې په مختلفو ګروپونو کې د موږکانو د بدن وزن د 7 ورځو لپاره وڅیړل شو.د G. duodenalis انفیکشن ګروپ او G. duodenalis + MCC950 انفیکشن درملنې ګروپ ترمنځ توپیر د SPSS سافټویر نسخه 22.0 په کارولو سره د ټیسټ لخوا تحلیل شوی.ستوري په *P <0.05، **P <0.01، یا ***P <0.001 کې د پام وړ توپیرونه په ګوته کوي.c د پرازیتي بار د ډوډینال لیویج مایع کې د ټرافوزایټس شمیرې په واسطه ټاکل شوی.د G. duodenalis انفیکشن ګروپ او G. duodenalis + MCC950 انفیکشن درملنې ګروپ ترمنځ توپیر د SPSS سافټویر نسخه 22.0 په کارولو سره د ټیسټ لخوا تحلیل شوی.ستوري په *P <0.05 کې د پام وړ توپیرونه په ګوته کوي.د هیماتوکسیلین او ایوسین (H&E) داغونه د ډوډینال هسټوپیتولوژي پایلې.سور تیرونه ویلی ته زیان ښیی، شنه تیرونه کریپټس ته زیان په ګوته کوی.د پیمانه بار: 100 µm.e، f د duodenal villus قد او د موږک کریپټ لوړوالی احصایوي تحلیل.ستوري په *P <0.05 او **P <0.01 کې د پام وړ توپیرونه په ګوته کوي.پایلې د 7 خپلواک بیولوژیکي تجربو څخه اخیستل شوي.BW، د بدن وزن؛ig، د انټراګاسټریک تحویلي لاره؛ip, intraperitoneal تحویلي لاره;ns، د پام وړ نه دی (P > 0.05)؛PBS، فاسفیت بفر شوی مالګین؛WT، وحشي ډول
د IL-1β سرایت د سوزش د فعالیت نښه ده.د دې لپاره چې معلومه کړي چې ایا G. duodenalis alpha-2 giardine او alpha-7.3 giardine په vivo کې د NLRP3 کوربه انفلاسیوم فعالوي، موږ د غیر درملنې WT موږک (شام ګروپ) او NLRP3 انفلاسیوم بلاک شوي موږکان (MCC950 مخنیوی شوي درملنې ګروپ) کارولي.د تجربې تفصيلي سکیم په شکل 4a کې ښودل شوی.په تجربوي ګروپونو کې موږکان شامل وو چې د PBS، G. duodenalis cyst درملنه د gavage پواسطه، د pcDNA3.1 intramuscular انجیکشن، او د pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine یا pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine intramuscular انجیکشن.په 7مه ورځ د بیا جوړونکي پلاسمید د انټرماسکولر ادارې وروسته ، سیرم راټول شو او په هر ګروپ کې د IL-1β کچه وټاکل شوه.لکه څنګه چې په 4b شکل کې ښودل شوي، د MOCK ګروپ کې: (i) د PBS ګروپ په پرتله، د pcDNA3.1 درملنه د IL-1β په سراو (ANOVA, F(4.29) = 4.062, P = 0.9998) باندې د پام وړ اغیزه نلري. د IL-β سرایت د G. duodenalis cyst ګروپ (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0002)، (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine او pcDNA3 کې د پام وړ لوړ شوی.1- د الفا-7.3 ګیرډین د انټرماسکولر انجیکشن د سیرم IL-1β کچه د پام وړ لوړه کړې (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P <0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 giardine induced IL-1β secretion د pcDNA3.1-alpha-2 giardine intramuscular انجیکشن ګروپ کې (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0333) .د MCC950 درملنې ګروپ او MOCK ګروپ کې د هرې ډلې سره پرتله کول: (i) د PBS کنټرول ګروپ او pcDNA3.1 کنټرول ګروپ کې د IL-1β د سراو کچه د MCC950 مخنیوی کونکي بلاک کولو وروسته تر یوې اندازې پورې کمه شوې ، مګر توپیر نه و. مهم (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) د MCC950 بلاک کولو وروسته.په G. duodenalis cyst-infected group، pcDNA3.1-alpha-2 giardine group، او pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine ګروپ (G. duodenalis: ANOVA, F(9) کې IL-1β سرایت د پام وړ کم شوی. , 58) = 3.540 , P = 0.0120; pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.0447; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA (958) ) = 3.540، P = 0.0164).دا پایلې وړاندیز کوي چې الفا - 2 ګیرډین او الفا - 7.3 ګیرډین په vivo کې د NLRP3 انفلاسیون فعالولو منځګړیتوب کوي.
pcDNA3.1(+)-giardines په vivo کې د NLRP3 کوربه انفلاسیون فعالوي.موږکان د recombinant eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine یا pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine سره واکسین شوي (IM) او بیا د MCC950 (ip; MCC950 ګروپ) یا نه (ډمي ګروپ) سره درملنه شوي. ).PBS یا pcDNA3.1(+) د پلازمید درملنې ګروپ د منفي کنټرول په توګه کارول شوی و، د G. duodenalis cyst درملنې ګروپ د مثبت کنټرول په توګه کارول شوی و.تجربه ګروپ او د درملنې رژیم.b په موږکانو کې د IL-1β سیرم کچه په 7 ورځ د ELISA ارزونې لخوا اندازه شوې.د MOCK ګروپ کې د ډلو تر مینځ توپیرونه د یو طرفه ANOVA په کارولو سره تحلیل شوي، او د MOCK ګروپ او MCC950 ګروپ ترمنځ توپیرونه د SPSS سافټویر نسخه 22.0 ټیسټ په کارولو سره تحلیل شوي.ستوري په MOCK ګروپ کې د درملنې ګروپونو ترمنځ د پام وړ توپیرونه په ګوته کوي، *P<0.05 او ***P<0.001;د ډالر نښې ($) په P <0.05 کې د MOCK ګروپ او MCC950 ګروپ کې د هرې ډلې ترمنځ د پام وړ توپیرونه په ګوته کوي.د اوو خپلواکو بیولوژیکي تجربو پایلې.i، د انټرماسکولر انجیکشن، ns، مهم نه دی (P > 0.05)
د G. duodenalis infectivity په اړه د NLRP3 کوربه انفلاسیوم د الفا-2 او الفا-7.3 giardine منځګړیتوب فعالیت د اغیزې تحقیق کولو لپاره، موږ د WT C57BL/6 موږکانو څخه کار واخیست او د الفا-2 ګیرډین او الفا-7.3 ګیرډین انجیکشن وکړ.پلاسمیډ د G. duodenalis cyst د معدې ټیوب له لارې د 3 ورځو وروسته په انټرماسکولر ډول انجیکشن شوی و ، وروسته له هغه چې موږکان د 7 ورځو لپاره مشاهده شول.د تجربې تفصیلي سکیم په 5a شکل کې ښودل شوی.د هر موږک د بدن وزن هره ورځ اندازه کیده، د تازه ډیوډینال نسجونو نمونې د معدې ټیوب له لارې د ادارې وروسته په 7مه ورځ راټول شوي، د ټرافوزایټس شمیره اندازه شوې، او د هسټوپیتولوژیکي بدلونونه لیدل شوي.لکه څنګه چې په 5b شکل کې ښودل شوي، د تغذیې د وخت په زیاتیدو سره، په هر ګروپ کې د موږکانو BW په تدریجي ډول زیاتیږي.د موږکانو MT د G. duodenalis cysts د انټراګاسټریک ادارې وروسته په دریمه ورځ کمیدل پیل کړل او بیا په تدریجي ډول لوړ شول.د NLRP3 انفلاسیون فعالول د الفا-2 ګیرډین او الفا 7.3 ګیرډین د انټرمسکولر انجیکشن لخوا هڅول شوي په موږکانو کې د پام وړ وزن کموي (ورځ 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 1.39 = 0.9754 ورځ 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 ورځ دویمه: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172، P = 0.9979؛ دوهمه ورځ: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409; دریمه ورځ: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, A 4, 30) = 0.8222, P = 0.0262 ورځ 3: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.8222, P = 0.0083; څلورمه ورځ: pcDNA3.1-alpha-2 , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, څلورمه ورځ: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P <0.0001, پنځمه ورځ: pcDNA3.1-alpha - 2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 ورځ 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 ورځ 6: pcDNA - 3.1 alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, 6 ورځ: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;اوومه ورځ: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 ورځ 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P <0.0001).د پرازیتي بار په ډوډینم (انځور 5c) کې ارزول شوی.د نه درملنې شوي مثبت کنټرول او د خالي pcDNA3.1 ویکٹر سره انجیکشن شوي ګروپ په پرتله ، د G. duodenalis trophozoites شمیر د α-2 giardine او α-7,3 giardine (pcDNA3.1-alpha) سره انجیکشن شوي ګروپونو کې د پام وړ کم شوی. -2 ګارډین: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P <0.0001).برسېره پردې، giardine alfa-7.3 په موږکانو کې د giardine alfa-2 (ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0081) په پرتله ډیر محافظت درلود.د HE داغونو پایلې په انځر کې ښودل شوي.5d-f.موږکان چې د الفا-2 giardine او alpha-7.3 giardine سره انجیکشن شوي د ډوډینال نسجونو لږ زخمونه لري چې د ویلس زیان لخوا څرګند شوي، د G. duodenalis سره د موږکانو په پرتله او د G. duodenalis سره د یو خالي pcDNA3 ویکٹر سره په ترکیب کې د موږکانو په پرتله.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 or P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, = 0.0028 یا P = 0.0055) او کم شوی کریپټ ایټروفي (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.470, P = 0.0264 یا P = 0.0158؛ pcDNA3.1-alpha-2 giardine: pcDNA3.1-alpha-2 giardine , F(3, 24) = 1.470، P = 0.0371 یا P = 0.0191).دا پایلې وړاندیز کوي چې alpha-2 giardine او alpha-7,3 giardine په vivo کې د NLRP3 انفلاسیون په فعالولو سره د G. duodenalis انتانات کموي.
د PcDNA3.1(+)-giardins رول په G. duodenalis انفیکشن کې.موږکان د recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine یا pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine سره واکسین شوي (IM) او بیا د G. duodenalis cysts (ig) سره ننګول شوي.د PBS ګروپ او pcDNA3.1(+) + د ډوډینال سیسټ درملنې ګروپ د منفي کنټرول ګروپونو په توګه کارول شوی و، او د ډوډینال سیسټ درملنې ګروپ د مثبت کنټرول ګروپ په توګه کارول شوی و.تجربه ګروپ او د درملنې رژیم.b د درملنې په مختلفو ګروپونو کې د موږکانو MT د ننګونې وروسته د 7 ورځو لپاره څارل شوی و.ستوري د G. duodenalis ګروپ او pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ګروپ، *P <0.05، **P <0.01، او ***P <0.001;د ډالر نښه ($) د G. duodenalis د هرې ډلې او pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 جارډین ګروپ، $$P<0.01 او $$$P<0.001 ترمنځ د پام وړ توپیر څرګندوي.c د پرازیتي بار د ډوډینم (3 سانتي اوږدوالي) څخه د 1 ملی لیتر ډیوډینال لیویج کې د ټرافوزایټونو شمیر په واسطه ټاکل شوی و او د ډیوډینم د هر سانتي مترو په اندازه د پرازیتونو شمیر ښودل شوی و.د G. duodenalis انفیکشن ګروپ، د pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ګروپ، او pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ګروپ ترمنځ توپیرونه د SPSS سافټویر 22.0 نسخه په کارولو سره د یو طرفه ANOVA لخوا تحلیل شوي.ستوري په **P <0.01 او ***P <0.001 کې د پام وړ توپیرونه په ګوته کوي.په ډوډینم کې هسټوپیتولوژیکي بدلونونه.سور تیرونه ویلی ته زیان ښیی، شنه تیرونه کریپټس ته زیان په ګوته کوی.د پیمانه بار: 100 µm.e، f احصایوي تحلیل د موږک duodenal villus height (e) او crypt height (f).په شکل 1d کې د ګروپونو ترمنځ توپیرونه د SPSS سافټویر نسخه 22.0 په کارولو سره د یو طرفه ANOVA لخوا تحلیل شوي.ستوري په *P <0.05 او **P <0.01 کې د پام وړ توپیرونه په ګوته کوي.د اوو خپلواکو بیولوژیکي تجربو پایلې.ns، د پام وړ نه دی (P > 0.05)
Giardia duodenum د انسانانو او نورو تی لرونکو حیواناتو د کولمو یو مشهور پرازیت دی چې د giardiasis لامل کیږي.په 2004 کې، دا د 6 کلونو په اوږدو کې د لوړ خپریدو له امله د WHO د غفلت شوي ناروغیو نوښت کې شامل شو، په ځانګړې توګه د ټیټ ټولنیز اقتصادي وضعیت په ټولنو کې [32].د معافیت طبیعي سیسټم د G. duodenalis انفیکشن په وړاندې د معافیت غبرګون کې مهم رول لوبوي.د موږک میکروفیجونه راپور شوي چې د حجرو څخه بهر د جالونو په خوشې کولو سره د G. duodenalis وژني او وژني [33].زموږ پخوانیو څیړنو ښودلې چې G. duodenalis، یو غیر انتفاعي خارجي پرازیت، p38 MAPK، ERK، NF-κB p65، او NLRP3 د موږک میکروفیجونو کې د انفلاسیون سیګنال لارې فعالوي ترڅو د کوربه التهابي غبرګونونو تنظیم کړي، او خوشې شوي GEV ممکن دا پروسې ته وده ورکړي.13]، 24].په هرصورت، دقیق PAMPs چې په GEV کې د NLRP3 انفلاسیون - تنظیم شوي سوزش کې ښکیل دي او په giardiasis کې د NLRP3 انفلاسوم رول باید روښانه شي.د دې دوو پوښتنو د رڼا کولو لپاره، موږ دا څیړنه ترسره کړه.
NLRP3 انفلاسوم د معافیت حجرو په سایتوپلازم کې موقعیت لري او د مختلفو ذراتو لکه یوریک اسید کرسټال، زهرجن، باکتریا، ویروسونو او پرازیتونو لخوا فعال کیدی شي.د باکتریا په مطالعاتو کې، زهرجن د کلیدي PAMPs په توګه پیژندل شوي چې د التهاب سینسر فعالوي، د سوزش او د حجرو مړینې المل کیږي [34].ځینې ​​ساختماني ډوله زهري توکي لکه د سټفیلوکوکس اوریوس [35] او ایسچریچیا کولی [36] څخه هیمولسین ، د انټروټوکسین (NHE) [37] څخه هیمولسین BL (HBL) ، د NLRP3 سوزش فعالولو هڅوي.ویروسي مطالعاتو ښودلې چې د ویروس پروټینونه لکه SARS-COV-2 لفافه (E) پروټین [38] او د زیکا ویروس NS5 پروټین [39] مهم PAMPs دي چې د NLRP3 ریسیپټر لخوا پیژندل شوي.د پرازیت په مطالعاتو کې، ډیری پرازیتونه راپور شوي چې د کوربه انفلاسیون فعالولو سره تړاو لري، لکه Toxoplasma gondii، Trichomonas vaginalis [40]، Trypanosoma cruzi [41]، او Leishmania [42].د توکسوپلازما ګونډی ویروس سره تړلی د ګران ګرانول پروټینونه GRA35، GRA42، او GRA43، د لیوس rat macrophages کې د pyroptosis د شاملولو لپاره اړین دي [43].برسېره پردې، د لشمانیا ځینې مطالعاتو په انفرادي مالیکولونو تمرکز کړی چې د NLRP3 انفلاسیون کې ښکیل دي، لکه پرازیت جھلی لیپوفاسفوګلیان [44] یا د زنک میټالوپروټیز [45].د annexin په څیر د الفا ګیرډین جینونو کورنۍ کې، الفا 1 ګیرډین د احتمالي واکسین نوماند په توګه ښودل شوی چې د موږک ماډل کې د G. duodenalis په وړاندې محافظت چمتو کوي [18].زموږ په څیړنه کې، موږ د G. duodenalis virulence factors alpha-2 او alpha-7,3 giardines غوره کړل، کوم چې د giardia لپاره ځانګړي دي مګر نسبتا لږ راپور شوي.دا دوه هدف لرونکي جینونه د pcDNA3.1(+) یوکریوټیک ایکسپریشن سیسټم ویکتور کې د سوزش د فعالیت تحلیل لپاره کلون شوي.
زموږ د موږک ماډل کې، د کیسپیس ټوټې ټوټې د سوځیدنې فعالولو نښه کونکي په توګه کار کوي.د محرک په وخت کې، NLRP3 د ASC سره تعامل کوي، پروکاسپیسونه استخدام کوي، او فعال کیسپیسونه تولیدوي چې پرو-IL-1β او pro-IL-18 په ترتیب سره په بالغ IL-1β او IL-18 کې جلا کوي -18.د انفلاسیون کیسپیسز (کاسپیسز -1، -4، -5 او -11) د سیستین پروټیزونو ساتل شوي کورنۍ دي چې د طبیعي دفاع لپاره مهم دي او د سوزش او پروګرام شوي حجرو مړینې کې ښکیل دي [46].Caspase-1 د کانونیکي انفلاسومونو په واسطه فعاله کیږي [47]، پداسې حال کې چې کیسپیس -4، -5، او -11 د غیر معمولي انفلاسیونونو د جوړولو په وخت کې ټوټه کیږي [48].په دې څیړنه کې، موږ د موږک پیریټونیل میکروفیجونه د ماډل په توګه کارولي او د G. duodenalis انفیکشن په مطالعاتو کې د کوربه NLRP3 سوزش فعالولو نښه کونکي په توګه د p20 caspase-1 cleaved caspase-1 څیړنه کړې.پایلو ښودلې چې ډیری الفا ګیرډینز د سوزش د عادي فعالیت لپاره مسؤل دي ، کوم چې د باکتریا او ویروسونو کې دخیل کلیدي ویروس مالیکولونو کشف سره مطابقت لري.په هرصورت، زموږ څیړنه یوازې یو ابتدايي سکرین دی او نور مالیکولونه شتون لري چې کولی شي غیر کلاسیک انفلاسیون فعال کړي، لکه څنګه چې زموږ پخوانۍ څیړنې د G. duodenalis انفیکشن کې دواړه کلاسیک او غیر کلاسیک انفلاسیون وموندل [13].د دې لپاره چې دا معلومه کړي چې آیا تولید شوي p20 caspase-1 د NLRP3 انفلاسیوم سره تړاو لري، موږ الفا-2 او الفا-7.3 ګیرډینز د موږک پیریټونیل میکروفیجونو ته انتقال کړل ترڅو د کلیدي مالیکول پروټین ایکسپریشن کچه او د ASC oligomerization کچه معلومه کړي، دا تاییدوي چې دواړه α-giardins فعالوي. انفلاسیون NLRP3.زموږ پایلې د Manko-Prykhoda et al. سره یو څه توپیر لري، چا چې راپور ورکړی چې یوازې د G. muris یا E. coli EPEC strains سره د Caco-2 حجرو محرک کولی شي د NLRP3، ASC، او caspase-1 د فلوروسینس شدت زیات کړي، که څه هم د پام وړ نه دی، پداسې حال کې چې د G. muris او E. coli لګښت څنګه د دریو پروټینونو کچه لوړه کړې [49].دا توپیر ممکن د جیارډیا ډولونو، حجرو لینونو، او لومړني حجرو په انتخاب کې د توپیرونو له امله وي.موږ د MCC950 په کارولو سره د 5-اونیو په ښځینه WT C57BL/6 موږکانو کې د Vivo Assess کې هم ترسره کړي، کوم چې د G. duodenalis لپاره ډیر حساس دي.MCC950 یو قوي او انتخابي کوچني مالیکول NLRP3 مخنیوی کونکی دی چې د نانومولر غلظت کې کینونیکي او غیر کانونیکي NLRP3 فعالیت بندوي.MCC950 د NLRP3 فعالیت منع کوي مګر د AIM2، NLRC4، او NLRP1 د انفلاسیون لارو یا TLR سیګنال لارو فعالولو اغیزه نه کوي [27].MCC950 د NLRP3 فعالیت بندوي مګر د NLRP3 پیل کول، K+ efflux، Ca2+ انفلوکس، یا د NLRP3 او ASC ترمنځ تعامل نه منع کوي؛پرځای یې، دا د ASC oligomerization بندولو سره د NLRP3 انفلاسیون فعالیت منع کوي [27].له همدې امله، موږ د ګیرډین انجیکشن وروسته د NLRP3 انفلاسیون رول ټاکلو لپاره په ویوو مطالعې کې MCC950 کارولی.فعاله کیسپیس-1 p10 د التهاب ضد سایټوکین پرو-IL-1β او پرو-IL-18 په بالغ IL-1β او IL-18 [50] کې ماتوي.په دې څیړنه کې، د MCC950 سره یا پرته د جیارډین درملنه شوي موږکونو کې د سیرم IL-1β کچه د دې شاخص په توګه کارول شوي چې ایا NLRP3 انفلاسیوم فعال شوی.لکه څنګه چې تمه کیده، د MCC950 درملنې د سیرم IL-1β کچه د پام وړ کمه کړې.دا ډاټا په روښانه توګه ښیي چې G. duodenalis giardin alfa-2 او giardin alfa-7.3 د NLRP3 موږک انفلاسیون فعالولو توان لري.
په تیره لسیزه کې راټول شوي د پام وړ معلوماتو ښودلې چې IL-17A د G. muris په وړاندې د معافیت ماسټر تنظیم کونکی دی، د IL-17RA سیګنال هڅوي، د انټي مایکروبیل پیپټایډ تولیدوي، او د بشپړولو فعالول تنظیموي [51].په هرصورت، د Giardia انفیکشن ډیر ځله په ځوانو لویانو کې واقع کیږي، او دا راپور شوي چې په ځوانو موږکانو کې د Giardia انفیکشن د IL-17A غبرګون نه فعالوي ترڅو خپل محافظتي اغیزه وکړي [52]، څیړونکي هڅوي چې د نورو معافیتي ګیرډیا په لټه کې شي.د هیلمینت انفیکشن میکانیزم.د یوې وروستۍ مطالعې لیکوالانو راپور ورکړی چې G. muris کولی شي د E. coli EPEC په واسطه د NLRP3 انفلاسیون فعال کړي، کوم چې د انټي مایکروبیل پیپټایډونو تولید هڅوي او په کولمو کې د هغې د ضمیمه کولو ظرفیت او د ټرافوزایټونو شمیر کموي، په دې توګه د کولمو شدت کموي. هغه ناروغۍ چې د باسیل له امله رامینځته کیږي [49].د NLRP3 انفلاسیون د مختلفو ناروغیو په پراختیا کې دخیل دی.مطالعاتو ښودلې چې Pseudomonas aeruginosa د حجرو د مړینې څخه مخنیوي لپاره په میکروفیجونو کې د آټوفګی رامینځته کوي ، او دا پروسه د NLRP3 انفلاسیون فعالولو پورې اړه لري [53].د N. caninum لپاره، د NLRP3 انفلاسیون منځګړیتوب فعال اکسیجن ډول فعال کول په کوربه کې د هغې نقل محدودوي، دا د احتمالي درملنې هدف جوړوي [9].Paracoccidioides brasiliensis موندل شوي چې د موږک د هډوکي میرو څخه ترلاسه شوي ډینډریټیک حجرو کې د NLRP3 انفلاسیون فعالولو هڅوي، چې په پایله کې د انفلاسیون سایټوکین IL-1β خوشې کیږي، کوم چې د کوربه دفاع کې مهم رول لوبوي [10].د لشمانیا څو ډولونه، په شمول د L. amazonensis، L. major، L. braziliensis، او L. infantum chagasi، په میکروفیجونو کې NLRP3 او ASC پورې تړلي کیسپیس - 1 فعالوي، او همدارنګه د لیشمانیا انفیکشن.د پرازیت نقل کول په موږکانو کې د NLRP3/ASC/caspase-1 جین کمښت ته وده ورکوي [11].Zamboni et al.د لشمانیا انفیکشن راپور ورکړل شوی چې په میکروفیجونو کې د NLRP3 انفلاسیون فعالولو هڅوي ، کوم چې د انټرا سیلولر پرازیت نقل محدودوي.په دې توګه، لشمانیا ممکن د مخنیوي ستراتیژۍ په توګه د NLRP3 فعالیت منع کړي.په vivo مطالعاتو کې، د NLRP3 انفلاسیون د لشمانیا له منځه وړلو کې مرسته کړې، مګر په نسجونو اغیزه نه کوي [54].برعکس، د هیلمینتیاسس مطالعاتو کې، د NLRP3 انفلاسیوم فعال کول د معدې هیلمینتیاسس په وړاندې د کوربه محافظتي معافیت فشاروي [12].شیګیلا یو له اصلي باکتریا څخه دی چې په ټوله نړۍ کې د اسهال لامل کیږي.دا باکتریا کولی شي د IL-1β تولید د P2X7 ریسیپټر - منځګړیتوب K+ efflux، عکس العمل اکسیجن ډولونه، lysosomal acidification، او mitochondrial loss له لارې رامینځته کړي.د NLRP3 انفلاسیوم په منفي ډول د شیګیلا په وړاندې د میکروفیجز فاګوسایټوس او باکتریا وژونکي فعالیت تنظیموي [55].د پلازموډیم مطالعاتو ښودلې چې د AIM2، NLRP3 یا caspase-1 نیمګړتیا موږک چې په پلازموډیم اخته شوي د 1 انټرفیرون لوړه کچه تولیدوي او د پلازموډیم انفیکشن په وړاندې ډیر مقاومت لري [56].په هرصورت، په موږکانو کې د NLRP3 التهاب د رنځجنیک فعالیت په هڅولو کې د الفا-2 ګیرډین او الفا-7.3 جیارډین رول روښانه ندی.
په دې څیړنه کې، د MCC950 لخوا د NLRP3 انفلاسیون مخنیوی BW کم کړی او په موږکانو کې د کولمو لیویج مایع کې د ټرافوزایټس شمیر ډیر کړی، چې په پایله کې د ډوډینال نسج کې ډیر سخت رنځپوهنه بدلونونه رامینځته شوي.Alpha-2 giardine او alpha-7.3 giardine د کوربه موږک NLRP3 انفلاسیون فعالوي، د موږک د بدن وزن زیاتوي، د کولمو د لامبو وهلو مایعاتو کې د ټرافوزایټس شمیر کموي، او د ډوډینال رنځپوهنې زخمونه کموي.دا پایلې وړاندیز کوي چې G. duodenalis کولی شي د NLRP3 کوربه انفلاسیون د الفا-2 ګیرډین او الفا-7,3 giardine له لارې فعال کړي، په موږکانو کې د G. duodenalis ناروغۍ کموي.
په ټولیزه توګه، زموږ پایلې ښیي چې الفا-2 او الفا-7.3 ګیرډینونه د NLRP3 کوربه انفلاسیون فعالولو هڅوي او په موږکانو کې د G. duodenalis انتان کموي.له همدې امله، دا مالیکولونه د giardiasis مخنیوي لپاره ژمن اهداف دي.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
ليانګ AKS، ليانګ AAM، هوانګ AHC، سرګي KM، کام JKM.Giardiasis: یوه کتنه.دا پدې وروستیو کې څرګنده شوه چې پیټ انفلایم د مخدره توکو سره حساسیت لري.2019؛ 13:134-43
Escobedo AA، Tsimerman S. Giardiasis: د فارماکوتراپی بیاکتنه.د درمل جوړونکي متخصص نظر.۲۰۰۷;۸: ۱۸۸۵-۹۰۲.
تیان هوفینګ، چن بن، وین جیانفینګ.Giardiasis، د مخدره توکو مقاومت او د نوي اهدافو کشف.د نشه يي توکو د هدف د ګډوډۍ اخته کوي.2010؛10:295-302.
وانګ Z، Zhang X، Xiao Yi، Zhang W، Wu X، Qin T، etc. NLRP3 التهابي او التهابي ناروغۍ.د اکسایډ میډ سیل لانګیف.2020;2020:4063562.
Chen GY، Núñez G. د کولمو التهاب او سرطان کې د التهاب رول.معدې.۲۰۱۱;141:1986-99
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. Canonical او atypical NLRP3 د انفلاسیون فعالیت د معافیت زغم او د کولمو التهاب په جریان کې.مخکی معافیت2017؛ 8:36.
لي L، وانګ XC، ګونګ PT، Zhang N، Zhang X، Li S، et al.د ROS منځګړیتوب د NLRP3 انفلاسیون فعال کول د N. کیینیم انفیکشن په ځواب کې ښکیل دي.پرازیت ویکتور.2020؛ 13:449